外泌体整体技术服务

外泌体整体技术服务

  外泌体（exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为 30-150 nm 的具有脂质双层膜的微小囊泡[1]。它广泛存在并分布于各种体液中，携带和传递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。2013年，发现细胞囊泡转运机制的科学家们，荣获了当年的诺贝尔生理学或医学奖。作为人体内的一类重要囊泡，外泌体自2013年起逐步成为科研热点。几乎所有类型的细胞都可以分泌外泌体，同时外泌体也广泛存在于体液中，包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究发现外泌体中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA 等）、蛋白、胆固醇等。外泌体的表面marker 主要有 CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP70 等[2]。因此，外泌体几乎可以与任何疾病相关联，成为疾病标志物、疾病机理、药物开发等研究的创新热点。

  安尔诺生物致力于为广大研究人员提供高品质的外泌体研究解决方案。安尔诺生物不仅自主研发了外泌体提取试剂盒，还提供包括外泌体超速离心、外泌体NTA分析、外泌体透射电镜拍摄、外泌体标志物蛋白Western Blot鉴定、外泌体蛋白质谱分析、外泌体分泌蛋白筛选、外泌体microRNA筛选、外泌体lncRNA筛选、外泌体RNA定量检测、外泌体示踪、外泌体细胞功能检测、外泌体动物实验等一系列服务环节的“一站式”外泌体服务体系，我司将为广大用户提供外泌体研究多方位的便利与支持。

外泌体应用领域

（1）疫苗

  疫苗接种载体，针对各种传染病的疫苗设计中发挥重要作用；

（2）基因治疗和组织再生

  心血管疾病基因治疗,在骨骼/肌肉/血管和神经/软骨/牙本质以及口腔和颅面再生中发挥重要作用；

（3）做为载体递送药物

  搭载核苷酸、小分子药物，搭载核苷酸、小分子药物肽及细胞因子；

（4）眼科疾病诊断

  视觉系统中可能有重要作用，如外泌体与青光眼和黄斑变性的病理生理相关；

外泌体服务类型

外泌体提取（超速离心法/试剂盒法/磁珠法），来源：细胞培养上清、血清、血浆、脑脊液、腹水、胸水、尿液、组织样本 等等。

外泌体鉴定（NTA粒径、透射电镜、WB[CD9/CD81/CD63/HSP70]、流式检测）

外泌体示踪/细胞对外泌体摄取行为

外泌体流式检测、外泌体载药(siRNA、质粒等)

外泌体高通量测序（miRNA/lncRNA）、外泌体lncRNA/circRNA芯片检测

外泌体miRNA/lncRNA/mRNA/circRNA定量PCR检测

外泌体蛋白质组学检测（Label-free/iTRAQ/TMT）

外泌体动物功能研究（外泌体注射动物、皮下荷瘤、活体成像、免疫荧光等）

外泌体细胞功能检测（细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移/侵袭等）

外泌体miRNA靶基因验证：双荧光素酶报告基因检测

外泌体整体课题服务（外泌体方案定制设计+实验等）  

外泌体超速离心

  超速离心是从生物体液或细胞上清分离外泌体的金标准方法。采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。目前在国外的重要期刊如Cell、Nature、Science以及其众多子刊中，超速离心是普遍应用的经典技术手段。

  安尔诺生物外泌体提取平台，有超速离心机，可满足大批量样本超离的需求。同时，安尔诺生物的外泌体超速离心实验体系在经典的实验方法上进行了大量的优化和调整，显著提高了外泌体超速离心的得率和稳定性。安尔诺生物的外泌体超离平台不但可以进行外泌体的提取工作，还可承接无外泌体血清制备项目。

 

外泌体鉴定服务

  对分离提取的外泌体进行鉴定的经典方案有：NTA分析（Nanoparticle Tracking Analysis）、电镜分析、蛋白标志物Western Blot鉴定等。安尔诺生物拥有完善的外泌体鉴定平台和技术体系，可提供全方位的外泌体鉴定服务。

NTA粒径分析

      纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle TrackingAnalysis, NTA）是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度，检测10nm–1000nm 范围内的颗粒。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一；相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。  

 

外泌体电镜分析

       双层囊膜结构（茶托状）是外泌体重要标志之一，但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。而透射电子显微镜(Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可达0.1 - 0.2 nm，可将被观察物体放大至数百万倍，是外泌体双层囊膜超微结构观测的经典方法。安尔诺生物有多种外泌体样品和上千张外泌体电镜图片的拍摄经验，在制样、拍摄、选片等方面具备丰富经验。

 

透射电子显微镜JEM-1230

外泌体标志物鉴定
      安尔诺生物通过对经典文献中普遍采用的抗体进行验证和挑选，优选了多种外泌体标志物抗体，如CD9、CD63、CD81、HSP70、TSG101、Alix等，针对不同来源的外泌体，我们还可协助用户对标志物进行合理选择，并可提供常见外泌体标志物的Western blot检测服务。

 

外泌体分析

     安尔诺生物可提供多种外泌体数分析服务，包括：外泌体蛋白质谱分析、外泌体分泌蛋白筛选、外泌体microRNA测序、外泌体microRNA芯片分析、外泌体lncRNA芯片检测等。

外泌体microRNA/lncRNA/circRNA筛选

  安尔诺生物可提供microRNA/mRNA的测序分析、miRNA芯片、lncRNA芯片、circRNA芯片和RNA定量检测服务。

 

荧光定量PCR实验

外泌体蛋白组分析

安尔诺生物拥有LC-MS/MS技术平台，针对不同的研究需求，为用户推荐合适的技术选择。质谱技术：适用于寻找广泛类型外泌体差异蛋白谱，在膜蛋白筛选上优势明显。

 

外泌体示踪（染料-PKH67 / PKH26 / DIO / DIL）

PKH-67（green）亲脂性染料，可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光， PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26（red）具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。

外泌体细胞功能检测

细胞增殖检测、细胞凋亡检测、细胞周期检测、细胞迁移检测、细胞侵袭检测

外泌体动物功能实验

 

外泌体整体课题服务

基因研究路线图：

蛋白研究路线图：

外泌体服务说明

（1）技术流程图

（2）客户提供与最终交付

  客户提供：细胞；培养上清；血浆（全血)；血浆（血清)等。

  服务内容：外泌体研究整体方案设计；外泌体提取/粒径测量/电镜检测；外泌体蛋白组/转录组。

  最终交付：泌体粒径检测报告；wB检测结果；q-PCR相关检测结果；电镜图片；NGS测序结题报告；蛋白组学结题报告。

（3）收费与周期