腺病毒包装

腺病毒包装

一、技术简介

腺病毒是目前最高效且可靠的重组病毒表达系统之一，可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白。腺病毒其具备以下优点：

1.宿主范围广。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞，除可感染几乎所有人的细胞类型外，还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。

2. 因腺病毒的感染不依赖细胞周期，故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。

3. 腺病毒具有嗜上皮细胞特性，因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞，这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。

4. 病毒滴度高，可用于动物水平的实验。

5. 有较好的生物安全性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中；实验中虽然会有一定机率出现RCA（即复制型腺病毒），但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体，所以一般危害不大。

腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细

胞的分裂。对于难转染的细胞，如原代或非分裂细胞，采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。采用293A腺病毒包装细胞系(含有腺病毒包装所必需的E1基因序列，是专为生产腺病毒和进行滴度测定而建立的)，用于高滴度的复制缺陷型(E1和E3缺失)腺病毒的生产，以进行外源基因的表达。

二、实验流程

1. 构建表达基因的腺病毒载体。

2. 采用PacI消化纯化的质粒。

3. 消化好的腺病毒表达载体转染293A细胞，收获细胞以制备病毒粗提液。

4. 将病毒粗提液感染293A细胞以扩增病毒。

5. 分装，-80℃保存。

三、服务说明及结果

1. 客户提供：提供基因名称，插入片段序列、NCBI登录号等信息。

2. 公司提供：病毒液病毒液（≥1×109pfu/mL），以及实验过程中所用的耗材、仪器设备和操作过程的说明一份。

3. 试验周期：30-40个工作日。